石蜡切片法及其注意事项

2022-07-14 09:21:56

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星期三

2017年11月

石蜡切片技术

组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。

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石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。

一般的步骤大家都知道，就不多说了，简单说几个需要注意的地方：

意

注

固定组织要在方便的前提下尽可能的小点，固定液根据组织来源不同要选合适的。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素；单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方见有关技术书籍）。

脱水要防止脱水过度引物组织萎缩。如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。

透明剂的浸渍时间则要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。如果透明时间过短，则透明不彻底石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，就不易切出完整切片，最长为数小时。

切片厚度，切片过薄和过厚均会影响接下来的实验，过薄了贴片与烤片不好做，有可能染色结果也不全；过厚了，可能染色会很难看，或者通透的时候很麻烦。

抗原修复，是一门技术活，一个修复不好，最后的免疫染色就不漂亮。

石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析是石蜡包埋组织切片与流式细胞术结合使用测DNA含量及倍体分析，这一结合是流式细胞仪在临床应用中，特别是在肿瘤研究方面开拓了新的研究途径。目前已可测量细胞的大小、体积、DNA含量、DNA合成速率、RNA含量、表面抗原、染色体等。

由于制备样品技术的原因，过去许多流式分析资料仅限于采用新鲜组织标本，而现在可以分析石蜡包埋组织切片制备分散细胞悬液技术来进行DNA含量的检测，从组织切片中能获得足够数量的单个细胞，且与新鲜组织分离获得的单个细胞在形态及DNA含量组方图上均极为相似。

写在后面

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